缓冲液

免疫细胞化学中应用的缓冲液种类较多，即使是同种缓冲液，其浓度、pH、离子强度等也常不同。在此介绍几种zui常用缓冲液的配制。

1、0.2mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffer，PB）

试剂： NaH2PO4·2H2O、Na2HPO4·12H2O。

配制方法：配制时，常先配制0.2mol/L的NaH2PO4和0.2mol/L的Na2HPO4，两者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸盐缓冲液（PB），根据需要可配制不同浓度的PB和PBS。

（1）0.2mol/L的NaH2PO4；称取NaH2PO4·2H2O 31.2 g 或NaH2PO4·H2O 27.6g加重蒸水至1000ml溶解。

（2）0.2mol/L的Na2HPO4：称取Na2HPO4·12H2O 71.632g（或Na2HPO4·7H2O 53.6g或Na2HPO4·2H2O 35.6g）加重蒸水至1000ml溶解。

（3）0.2mol/L pH7.4的PB的配制：取19ml 0.2mol/L的NaH2PO4和81ml 0.2mol/L的Na2HPO4·12H2O，充分混合即为0.2mol/L的PB（pH约为7.4～7.5）。若pH偏高或偏低，可通过改变二者的比例来加以调整，室温保存即可。

2、0.01mol/L磷酸盐缓冲生理盐水（Phosphate Buffered Saline, PBS）

试剂：0.2 mol/L PB　　　    50ml

   NaCl 　　　　　　　8.5～9g（约0.15mol/L）

   　重蒸水 　　　　　　至1000ml

配制方法：称取NaCl8.5～9g及0.2mol/L的PB50ml，加入1000ml的容量瓶中，zui后加重蒸水至1000ml，充分摇匀即可。若拟配制0.02mol/L的PBS，则PB量加倍即可，依此类推。

PB和PBS是免疫细胞化学实验中zui为常用的缓冲液，0.01mol/L的PBS主要用于漂洗组织标本、稀释血清等，其pH应在7.25～7.35之间，否则需要调整。0.1mol/L的PB常用于配制固定液、蔗糖等。一般情况下，0.2mol/L PB的pH值稍高些，稀释成0.01mol/L的PBS时，常可达到要求的pH值，若需调整pH，通常也是调PB的pH。

3、Karasson–Schwlt's磷酸盐缓冲液

试剂：  NaH2PO4·H2O            3.31g

     Na2HPO4·7H2O           33.77g

     　　重蒸水 　　　　　　　至1000ml

配制方法：同前。该缓冲液主要用于配制Zamboni's固定液。

4、0.5mol/L pH7.6的Tris- HCl缓冲液。

试剂：Tris(三羟甲基氨基甲烷)　　60.57g

   　1 N HCl　　　　　　　　　约420ml

   　重蒸水 　　　　　　　　　至1000ml

配制方法：先以少量重蒸水（300～500ml）溶解Tris，加入HCl后，用1N的HCl或1N的NaOH将pH调至7.6，zui后加重蒸水至1000ml。此液为储备液，于4℃冰箱中保存。免疫细胞化学中常用的Tris-HCl缓冲液浓度为0.05mol/L，用时取储备液稀释10倍即可。

该液主要用于配制Tris缓冲生理盐水（TBS）、DAB显色液。

5、Tris缓冲生理盐水（Tris Buffered Saline，TBS）

试剂：0.5mol/L Tris-HCl缓冲液　　　100ml

   　NaCl　　　　　　　　　　　3.5～9g（0.15mol/L）

  重蒸水　　　　　　　　　　　至1000ml

配制：先以重蒸水少许溶解NaCl，再加Tris-HCl缓冲液，zui后加重蒸水至1000ml，充分摇匀使Tris终浓度为0.05mol/L。

TBS主要用于漂洗标本，常用于免疫酶技术中。

6、Tris-TBS（TBS）

试剂：Triton X-100　　　　　　         　10ml（1%）或3ml（0.3%）

  　 0.5mol/L Tris缓冲液（pH7.6）　　1000ml（50ml）或（0.2mol/L的PB）

    　NaCl　　　　　　　　　　　　　8.5～9g

    重蒸水　　　　　　　　　　　　至1000ml

配制方法：先以重蒸水少许溶解NaCl后，加入Triton X-100及Tris缓冲液或（PB），zui后加重蒸水至1000ml，充分摇匀。

该液常用浓度为1%及0.3%，前者主要用于漂洗标本，后者主要用于稀释血清。细胞

7、0.1mol/L（pH7.4）二甲胂酸缓冲液

试剂：0.2mol/L二甲胂酸钠　　　　　　500ml

    　0.1N HCl　　　　　　　　　　　28ml

   蒸馏水　　　　　　　　　　　　至1000ml

配制方法：先称取二甲胂酸钠（MW：214）42.8g，加蒸馏水至1000ml，使0.2mol/L的二甲胂酸钠溶液；再取HCl1.7ml加蒸馏水至1000ml，配成0.1N，zui后取0.2mol/L二甲胂酸钠溶液500ml及0.1N HCl28ml混合，加蒸馏水至1000ml，即为0.1mol/L的二甲胂酸钠缓冲液。