ELISA试剂盒程序
(1) 压迹：根据样品的数量剪取一片硝酸纤维素膜或混合纤维素膜。用直径3～5mm圆形打孔
器(琼脂平板打孔器)，在膜的光滑面按顺序压上痕迹，作为点样部位。将膜置蒸馏水中浸泡，待*浸湿后，取出室温自然干燥。
(2) 点样：用微量移液器分别吸取1～2μl(或用玻璃棒、毛细管蘸一滴)被检抗原液，滴于
圆圈内，自然干燥。为增加抗原吸附量，也可在点样干燥后，再进行第二次点样。同时作阴、阳性抗原对照。
(3) 封闭：将膜置平皿或小池内，加入封闭剂，37℃浸泡30～60min。取出稍置片刻，用洗液漂洗2次，晾干。
(4) 与AFMcAb或OFPcAb反应：用保温液对AFMcAb或OFPcAb作适当稀释，加入反应池中，于37℃覆盖膜2h。
(5) 洗涤：用洗涤液漂洗膜3次，每次3min，晾干。
(6) 与酶结合物反应：冻干辣根过氧化物酶标记兔抗BALB/c鼠抗体用保温液作1∶80稀释，37℃覆盖膜1h。
(7) 洗涤：3次，方法同上。
(8) 显色：将膜浸入底物溶液中，避光染色5～15min。
(9) 终止反应：用蒸馏水漂洗滤膜，晾干。
3 结果判定在阴、阳对照正常情况下，以在膜圆圈内出现棕色斑点为阳性，无色为阴性。膜干燥后，可长期保存。
在应用DELISA试剂盒间接法、双抗体夹心法等检测方法时，如果膜上包被的是已知的标准抗原或抗体，而不是被检样品，为了操作方便，可将上述的“诊断膜"按压迹剪成小片，置微量反应板的小孔中。在微孔中，“诊断膜"与相应的被检样品和诊断液发生一系列的抗原抗体反应和酶促反应。在试验中，被检样品和诊断液的用量均为每孔50μl，其他反应条件和操作法与常规ELISA相同。
4 注意事项
1 点样量不易过大，以免溢出压迹圈外，造成各样品混合，如要增加样品吸附量，可在一次点样干燥后，再进行第2次点样。
2 膜包被后，一定要封闭确实，防止抗原或抗体的非特异性吸附，避免膜本底染色过深。
3 结果判定时，应与阴、阳性对照斑点反复比较，ELISA试剂盒尽量克服肉眼观察所带来的误差。